棉酚(Gossypol)ELISA试剂盒

棉酚(Gossypol)ELISA试剂盒

本试剂盒仅供研究使用。     

使用目的：

本试剂盒用于测定样本中棉酚(Gossypol)的含量。

实验原理

本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔板包被有棉酚（Gossypol）偶联抗原，加入棉酚（Gossypol）标准品或样品，游离棉酚（Gossypol）与微孔条上预包被的棉酚（Gossypol）偶联抗原互相竞争抗棉酚（Gossypol）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中棉酚（Gossypol）含量成反比，通过标准曲线计算样品中棉酚（Gossypol）的含量。 

试剂盒组成 

1 预包被的棉酚（Gossypol）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。

2 棉酚（Gossypol）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。

3 抗棉酚（Gossypol）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。

4 显色液A：1瓶（6ml）。

5 显色液B：1瓶（6ml）。

6 终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。

7 样本稀释液：1瓶（10×,  6ml），用于样品稀释用。

8 浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。

9 说明书一份。

标本要求 

注意事项

1. 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

2. 不要使用过期试剂盒。

3. 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。

4. 标准品中含有黄曲霉素，使用时应特别注意，操作时应带手套。

5. 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

6. 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。

7. 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。

8. 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果

9. 混合试剂时应避免起泡。

工作液准备

1. 棉酚（Gossypol）标准品溶液：0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。

2. 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

3. 样本稀释液：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

4. 显色剂：已备用，避免光线直照

5. 反应终止液：已备用

样品处理程序
样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存

1. 取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液

2. 强力振荡3分钟

3. 用Whatman No 1滤纸过滤

4. 取25µl处理后的样品，加入25µl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2）

特异性

物质 交叉反应

棉酚（Gossypol） 100%

试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0.05ppb

B0吸光度最佳值应大于1.0

试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。