植物线粒体蛋白提取试剂盒

植物线粒体蛋白提取试剂盒

产品介绍

本系列试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。本系列试剂盒提取的蛋白可用于 SDS-PAGE 、Western  Blotting 、IP 、ELISA 实验，提取的蛋白经过脱盐后，还可以直接进行转录活性分析、Gel  shift  凝胶阻滞实验、蛋白质检测分析、酶活检测等下游蛋白研究实验，提取的蛋白还可以用于小型色谱柱纯化、蛋白层析纯化的原料使用。本试剂盒的所有组份不含强离子型去垢剂成分，不会破坏蛋白的天然结构，不干扰蛋白之间相互作用的影响，提取的蛋白经过脱盐、浓缩后也可直接用于质谱精密实验。本试剂盒不含有 EDTA ，同时对金属螯和层析、分子筛、离子交换等层析纯化没有影响。

线粒体是真核细胞中由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的重要细胞器结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成 ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行，植物线粒体蛋白提取试剂盒提供适用于从植物样品中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便，耗时较短。推荐的蛋白浓度测定方法为：BCA  法、Lowry  法。 （试剂中含有少量去污剂，会干扰 Bradford 法的组份，可能导致定量结果有偏差。）如果已经进行过透析、脱盐处理更换缓冲液，则可以用于多种定量方法。

产品组成 :

操作步骤 : 

仪器耗材准备：离心机、振荡器/混匀器、匀浆器/研磨杵、冰盒、移液器、离心管、吸头；

自备试剂：PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒；

注：蛋白酶抑制剂混合物不可以一次性全部加入，需要根据样品数量准备提取液，加入对应比例的蛋白酶抑制剂混合物，已经添加的提取液可以 4℃存放 3-5 天；超过 5 天，下次使用还需要单独加入；特殊实验需求的，可以参考注意事项进行添加。

样品准备：为方便后续蛋白提取操作，获得高质量的蛋白，进行实验前需要对不同的样品进行处理，先用 PBS  缓冲液对样品进行彻底的清洗，并将样品处理到尽可能的细小。
注：血、液体样品无需进行前处理； 细胞、细胞器样品需要离心去除培养基和保存液； 器官组织、植物叶片等样品需要用剪刀剪成长度 2-3cm 小块；角质、骨组织等坚硬样品采用机械方法破碎成小块；植物根、茎、种子、果实等样品采用物理方法处理成小块。

提取液准备：每 200μL 冷的试剂 C 中加入 2μL 试剂 D，混匀后置冰上备用。

1.   取 200-300mg 新鲜植物样本叶片，用PBS 洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。

2.   加入 1mL 试剂 A 后用匀浆机充分匀浆或者加适量试剂 A 后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

3.   将匀浆液在 4℃ 、100g 离心 1min。

4.   用 1mL 枪头转移上清至新管。500×g 离心 5min，弃沉淀，取上清。

5.   将上清转移至新管，800g 离心 5min，弃沉淀，收上清。

6.   将上清转移至新管，2000g 离心 5min，弃沉淀，收上清。

7.   将上清转移至新管，12000g 离心20min。弃上清，收沉淀。

8.   在沉淀中加入 500μL 试剂 B 重悬。

9.   将悬液 12000g 离心 20min，弃上清，收沉淀。

10.  在沉淀中加入 100-200μL 试剂 C，充分混匀。置 4℃振荡20-40min。

11.  在 4℃ , 14000g 离心 15min。

12.  将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。

13.  将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

使用前请注意 :

1.  蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以 2-8℃储存，开盖使用后-20℃储存。蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后，将盖和管内壁上的微量液体离心至管底后，再开盖使用。

2.  试剂拆封后请尽快使用完！

产品特点 :

1.    操作步骤简单，易提取，使用方便。

2.    耗时时间短，大部分样品蛋白可以在使用前进行快速制备。

3.    蛋白稳定性好，包含特定的蛋白稳定剂成份。

4.    蛋白得率高，提取的蛋白无需进行浓缩即可直接用于 SDS-PAGE 检测。

5.    提取蛋白的完整性好，本试剂盒提供了专用于植物样品的蛋白酶抑制剂混合物，包含多种独立的蛋白酶抑制剂，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

注意事项 :

1.   珍贵样本实验前，建议先做预实验，优化实验条件，取得最佳实验提取效果。

2.   实验过程中的所有试剂须预冷，整个过程须保持样品处于低温。

3.   禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4.   蛋白丰度低，可增加样本处理用量，延长裂解时间和震荡时间来充分裂解样品 。

5.   SDS-PAGE   电泳背景高、条带扭曲，可以适当将样品进行稀释，过高浓度的蛋白会在凝胶孔隙中沉积，从而阻塞了电泳缓冲液的流动。

6.   裂解后粘稠，属于正常现象，证明裂解比较充分，如果出现胶状不溶解小块，则是大量基因组聚集导致，常规实验可进行离心处理取上清即可。（若要检测同基因组结合特别紧密的蛋白，则需要进行超声，再进行离心取上清，超声条件推荐：功率 100-300w，超声5-10s，间隔 10s，处理 3min。）

7.   提取的蛋白后续出现析出情况，需要停止使用，需要重新进行制备和低温保存。（若后续不进行蛋白天然结构和活性相关检测，可以用含变性剂成份试剂溶解沉淀和稀释样品， 如：β-ME 、DTT、尿素、盐酸胍等。） 

8.    样品使用前请检查是否存在析出或浑浊情况，若有析出可短暂 37℃水浴溶解后使用；若出现污染情况，请停止使用，细菌或真菌的污染可能会导致错误的交叉结果。

9.    蛋白酶抑制剂混合物属于非必需添加成份，提取的样本如果有特殊要求，并且不进行长期保存情况下，可以不添加。（如果是进行特定蛋白酶活性检测，提取液不加蛋白酶抑制剂，需注意提取过程保持低温，缩短离心时间即可；如果是固定组织、干组织等特殊样本，不用于相关蛋白活性检测的，无需使用蛋白酶抑制剂。） 

10.  使用过程中注意避免皮肤或粘膜与试剂直接接触。

11.  本试剂盒仅供科研使用，不可用于医疗诊断，试验后样品及器皿按照规定程序处理。

保 存 : 2-8℃ 。蛋白酶抑制剂收到货后，-20℃避光保存，有效期 1 年。